PCR實驗到底需要哪些種類的酶
更新時間：2023-04-03 瀏覽次數：2204
聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的核苷酸片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊核苷酸復制，PCR的最大特點是能將微量的核苷酸進行大幅擴增，從而達到容易鑒定和識別程度。
各種PCR到底需要哪些種類的酶？下面一起跟著遠慕生物來了解一下。
DND聚合酶——又稱DNA依賴的DNA聚合酶
它是以DNA為模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一類酶。DNA聚合酶根據聚合酶活力特征和外切酶活性特征的不同，有可以分為多種。在IVD領域中比較常見的酶如下：
Taq DNA聚合酶——Taq DNA聚合酶是第一個被發現的熱穩定DNA聚合酶，分子量65kD，
從Thermus aquaticus中分離出來，是目前科研和分子診斷試劑盒里最為廣泛應用的聚合酶。為了更優化PCR反應體系，Taq DNA 聚合酶被進行了一系列的性能提升和優化，其中最為熟知的就是熱啟動Taq酶，該酶被進行了化學修飾、抗體修飾或者配體修飾。無論是哪種修飾，其原理都是：在反應體系加熱至高溫之前，Taq DNA 聚合酶活性被“修飾"抑制，進而抑制低溫條件下的非特異性擴增。另外，還有一系列突變體Taq DNA聚合酶被篩選出來以滿足耐鎂離子、耐鹽、高保真等要求。
Bst鏈置換DNA聚合酶——Bst DNA聚合酶是來源于 Bacillus stearothermophilus的DNA Polymerase I，經基因工程改造去除了其 5’-3’核酸外切酶活性，但保留了 5’-3’ DNA 聚合酶活性和強鏈置換活性。同時，該酶在擴增速度、產量、耐鹽性和熱穩定性等方面均有大幅提高，而且增加了dUTP耐受性，非常適合于防污染的等溫擴增反應，如 LAMP 等。
由于此次新冠的影響，Bst成為IVD領域內又一個DNA聚合酶寵兒。
Tth DNA聚合酶——Tth DNA聚合酶來自Thermus thermophilus HB8，其最有趣的現象是：在Mg2+條件下，Tth DNA聚合酶具有較強的DNA聚合酶活性。在Mn2+條件下，Tth DNA聚合酶具有更強的反轉錄活性。這一特性使得Tth DNA聚合酶搭配相應的buffer可以同時對DNA模板和RNA模板進行擴增。
逆轉錄酶——又稱為RNA依賴的DNA 聚合酶
該酶以RNA為模板，按5'-3'方向合成一條與RNA模板互補的DNA單鏈，這條DNA單鏈叫做互補DNA (complementary DNA，CDNA)。最chang用的逆轉錄酶為M-MLV和AMV。
RNA聚合酶——一條DNA鏈或RNA為模板的聚合酶
也稱為轉錄酶。最為常見的是T7 RNA聚合酶，分子量約99kDa。專門催化5'→3'方向的RNA形成過程。目前體外診斷中， SAT技術中會看到RNA 聚合酶的身影。
實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術（Simultaneous Amplification and Testing，簡稱SAT）是將新一代的核酸恒溫擴增技術和實時熒光檢測技術相結合的一種新型核酸檢測技術。該技術具有高靈敏度、高特異性、低污染、反應穩定等優點。同一溫度下，首先通過M-MLV反轉錄酶產生靶標核酸（RNA）的一個雙鏈DNA拷貝，然后利用T7 RNA多聚酶從該DNA拷貝上產生多個（100～1000個）RNA拷貝；每一個RNA拷貝再從反轉錄開始進入下一個擴增循環；同時，帶有熒光標記的探針和這些RNA拷貝特異結合，產生熒光。該熒光信號可由熒光檢測儀器實時捕獲，實時反映擴增循環情況。
蛋白酶K——能夠酶解樣本中的各類蛋白質的酶
蛋白酶K是一種從白色念珠菌分離出來的強力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，在較廣的pH范圍（4?12.5)內及高溫 (50?70°C)下均有活性，EDTA等螯合劑或SDS等去垢劑均不能使之失活。用于質?；蚧蚪MDNA、RNA的分離和抽提。在病毒核酸檢測中，蛋白酶K是病毒采樣液中的重要組分之一，蛋白酶K可以裂解病毒的外殼蛋白并使其失活，同時將病毒基因組釋放以便后續進行核酸抽提。
當然，除了以上提及的酶以外，還有其他各種各樣的酶被廣泛應用。
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